Problemi u održavanju vitalnosti stanica u sustavu za snimanje živih stanica tijekom snimanja
Ostavite poruku
Snimanje živih stanica važan je analitički alat u laboratorijima koji proučavaju biomedicinske istraživačke discipline, poput stanične biologije, neurobiologije, farmakologije i razvojne biologije. Snimanje fiksnih stanica i tkiva (za koje je fotoizbjeljivanje glavni problem) obično zahtijeva visok intenzitet osvjetljenja i dugo vrijeme ekspozicije; međutim, to se mora izbjegavati kod snimanja živih stanica. Mikroskopija živih stanica obično uključuje kompromis između dobivanja kvalitete slike i održavanja zdravih stanica. Stoga, kako bi se izbjegao visok intenzitet osvjetljenja i dugo vrijeme ekspozicije, prostorne i vremenske rezolucije često su ograničene u eksperimentu. Snimanje živih stanica uključuje širok raspon metoda snimanja s pojačanim kontrastom za optičku mikroskopiju. Većina istraživanja koristi jednu od mnogih vrsta fluorescentne mikroskopije, a to se često kombinira s tehnikama propusnog svjetla, o čemu će biti riječi u nastavku. Stalni napredak u tehnikama snimanja i dizajnu fluorescentnih sondi poboljšavaju snagu ovog pristupa, osiguravajući da će snimanje živih stanica i dalje biti važan alat u biologiji.
Važna mjera opreza je osigurati da su stanice u dobrom stanju i normalno funkcioniraju dok su na postolju mikroskopa s osvjetljenjem u prisutnosti sintetičkih fluorofora ili fluorescentnih proteina. Uvjeti pod kojima se stanice drže na stoliću mikroskopa, iako vrlo različiti, često diktiraju uspjeh ili neuspjeh eksperimenta.
Dostupni su različiti mediji za stanične kulture na temelju posebnih biokemijskih zahtjeva stanica. Medij kulture sadrži različite sastojke, uključujući aminokiseline, vitamine, anorganske soli (minerale), elemente u tragovima, sastojke nukleinskih kiselina (baze i nukleozide), šećere, intermedijere ciklusa trikarboksilnih kiselina, lipide i koenzime. U medijima za kulturu tkiva važan korak je kontrola koncentracije kisika, pH, puferskog kapaciteta, osmolarnosti, viskoznosti i površinske napetosti. Komercijalno dostupne formulacije medija često uključuju indikatorsku boju (npr. fenol crveno) za vizualno određivanje približne pH vrijednosti. Puferski sustav ugljičnog dioksida i bikarbonata za regulaciju pH potreban je za gotovo sve stanične linije. Stanice je potrebno uzgajati u atmosferi koja sadrži malu količinu ugljičnog dioksida (obično 5-7%) u inkubatorima kako bi se kontrolirala koncentracija otopljenog plina. Za snimanje živih stanica može biti teško osigurati odgovarajuću atmosferu s ugljičnim dioksidom, a to obično zahtijeva posebno dizajnirane komore za kulture za reguliranu atmosferu. Potrebe za kisikom mogu varirati među staničnim linijama, ali normalne razine atmosferske napetosti kisika prikladne su za većinu kultura. Što se tiče osmolarnosti, većina staničnih linija ima veliku toleranciju na osmotski tlak, s dobrim rastom na osmolarnostima između 260 i 320 milliosmolara. Kada se stanice uzgajaju u kulturama na otvorenoj ploči ili Petrijevim zdjelicama, hipotonični medij se može koristiti za rješavanje isparavanja.
